微生物实验室常用物品采用的灭菌方法

【专家解说】：一、物理消毒灭菌法 物理消毒灭菌法是医学实践中常用的方法，通常包括热力、紫外线、辐射、超声波和滤过除菌等。 (一)热力灭菌法 热力能破坏微生物的蛋白质和核酸，使蛋白质变性凝固，核酸解链崩裂，从而导致其死亡。 1.干热灭菌法 常用焚烧、烧灼和干烤等方法。 (1)焚烧与烧灼 焚烧仅用于废弃的被病原微生物污染的物品、垃圾、人及动物尸体等。烧灼用于微生物实验室的接种环、金属器械、试管口、瓶口等的灭菌。 (2)干烤 使用干烤箱灭菌，一般需加热至160℃～170℃经2h，可达到灭菌的目的。适用于玻璃器皿、瓷器、金属物品等的灭菌。 2.湿热消毒灭菌法 (1)巴氏消毒法 法国学者巴斯德创用而得名。主要以较低温度杀灭病原菌或特定微生物，而使物品中不耐热成分不被破坏。此法有两种：一种方法是加热61.1℃～62.8℃、30min；另一种方法是加热71.7℃、15～30s。现在人们多用后种方法对牛奶进行消毒。 (2)煮沸法 煮沸100℃、5～10min，可杀死细菌繁殖体。芽胞则需要煮沸1～2h。常用于注射器、食具与饮水的消毒。 (3)流通蒸气法 用阿诺(Arnold)蒸锅或普通蒸笼，加热100℃、15～30min，可杀灭细菌的繁殖体。若将消毒后的物品放入37℃孵箱培养，使芽胞发育成繁殖体，次日再蒸一次，如此连续三次以上，可达到灭菌效果，这种方法称为间歇灭菌法。常用于不耐高温的物品，如糖类、血清和鸡蛋培养基等的灭菌。 (4)高压蒸气灭菌法 是一种迅速而有效的灭菌方法。使用高压蒸气灭菌器，利用加热产生蒸气，随着蒸气压力不断增加，温度随之升高，通常压力在103.4kPa(相当旧制的15磅/吋 2 或1.05kg/cm 2 )时，器内温度可达121.3℃，维持15～30min，可杀灭包括芽胞在内的所有微生物。此法常用于一般培养基、生理盐水、手术器械及敷料等耐湿和耐高温物品的灭菌。 (二)紫外线与电离辐射 1.日光与紫外线 日光消毒是最简单、经济的方法，将病人的被褥、衣服、书报等在日光下曝晒数小时，可杀死表面的大部分微生物。日光中杀菌的成份主要是紫外线。紫外线200～300nm时，具有杀菌作用，其中以265～266nm波长的紫外线杀菌力最强。紫外线的杀菌原理，主要是细菌DNA吸收紫外线后，一条链上相邻的两个嘧啶通过共价键结合形成二聚体，从而干扰了DNA的正常碱基配对，导致细菌死亡或变异。 紫红外线能透过石英，但不能穿过一般玻璃或薄纸，因此，紫外线只适用于物体表面及空气的消毒。例如手术室、婴儿室、传染病房、无菌制剂室、微生物接种室的空气消毒。 2.电离辐射 X射线、γ射线和阴极射线等电离辐射，有较高的能量与穿透力，因而可产生较强的致死效应。其机制在于产生游离基，破坏DNA。此法常用于大量一次性医用塑料制品的消毒；亦可用于中药成药和食品的消毒，而不破坏其化学成分和营养成分。 (三)超声波 超声波是不被人耳感受的高于 20千周/s的声波。其杀菌机制主要是它通过水时发生空化作用，而破坏了细菌细胞质的胶体状体，使其胞膜、胞质分离，胞壁及胞膜破碎致细菌繁殖体死亡。此法主要用于粉碎细胞，以提取细胞组分或制备抗原等。 (四)微波 是一种波长为 1mm到1m左右的电磁波，称微波。它能穿透玻璃、塑料薄膜与陶瓷等物质，但不能穿透金属表面。目前用于消毒的微波有2,450MHz与915MHz两种，常用于检验室用品、非金属器械、无菌病室的食品用具及其它用品的消毒。 (五)滤过除菌 滤过除菌是用滤菌器阻留过滤液体和气体的细菌，以达到无菌的目的。滤菌器含有微细小孔，只允许液体或气体通过，而大于孔径的细菌等颗粒不能通过。常用滤菌器有蔡氏滤器、玻璃滤器、薄膜滤器及高效颗粒空气滤器四种。主要用于不耐热的血清、抗毒素、生物药品以及空气等的除菌。 二、化学消毒法 许多化学药物都有抑制或杀灭微生物作用，按作用不同分为化学消毒剂和化学治疗剂两类，用于消毒、防腐和治疗疾病。 (一)常用消毒剂的种类和应用 具有杀死微生物的化学药物称消毒剂。消毒剂对人体有毒性作用，只能外用，不能内服。主要用于皮肤粘膜的伤口、器械、排泄物和周围环境的消毒。消毒剂在低浓度时也可作防腐用，但防腐剂的关键是应要对人体无毒性作用。消毒剂种类浓度与用途见表 13-1。 表 13-1 常用消毒剂的种类浓度与用途 类别 名称 浓度 用途 重金属盐类 红汞 2% 皮肤粘膜的小创伤消毒 升汞 0.05%～0.1% 非金属器皿浸泡消毒 硝酸银 1% 新生儿滴眼防淋球菌感染 氧化剂 高锰酸钾 0.1% 皮肤粘膜消毒 过氧化氢 3% 皮肤粘膜创口消毒 过氧乙酸 0.2%～0.5% 塑料、玻璃器材消毒 碘酒 2.0%～2.5% 皮肤消毒 氯 0.2ppm～0.5ppm 饮水及游泳池消毒 漂白粉 10%～20% 地面、厕所与排泄物消毒 醇类 乙醇 70%～75% 皮肤、体温表消毒 酚类 石碳酸 3%～5% 地面、器具表面的消毒 来苏 2% 皮肤消毒 醛类 甲醛 10% 物品表面、空气消毒 戊二醛 2% 精密仪器、内窥镜消毒 表面活性剂 新洁尔灭 0.05%～0.1% 皮肤粘膜、器械消毒 杜灭芬 0.05%～0.1% 皮肤创伤冲洗、金属器械、塑料、橡皮类消毒 染料 龙胆紫 2%～4% 浅表创伤消毒 酸碱类 醋酸 500mml/100m 3 加等量水蒸发 空气消毒 食醋 2%溶液， 3～5ml/m 3 熏蒸消毒空气 生石灰 加水 1：4 或 1：8 配成糊状 排泄物及地面消毒