β-胡萝卜素和番茄红素的提取分离与测定的实验设计

【专家解说】：简单的讲，标准的方法是先通过色谱柱分离，然后打红外谱，核磁谱，质谱，就基本可以了 实验步骤 1、混合色素的提取 称取新鲜番茄浆[1]10g于50ml干燥的圆底烧瓶中，加极性的试剂(建议用95%乙醇)［A］20ml，摇匀，装上回流冷凝管及恒温磁力搅拌器，在相应温度的水浴中加热，回流5分钟，冷却后抽滤，滤液直接进入一个的50ml锥形瓶中。残渣转入原50ml圆底烧瓶中瓶内，加入15ml低极性溶剂(建议用二氯甲烷)［A］，在相应温度的水浴上回流5分钟，冷却，混合物常压过滤，滤液直接滤入以上50ml锥形瓶中，再加5ml低极性溶剂洗涤残渣，过滤。合并高极性提取液和两次低极性提取液，倒入100ml分液漏斗中，加4ml饱和氯化钠溶液[2]，振荡萃取，静置分层。分出较深色有机相后，使其流经一个在颈部装有疏松棉花且在棉花上铺有6g无水硫酸钠的漏斗，以除去其中的微量水份。再用5ml低极性溶剂洗涤干燥剂，合并干燥后所得的溶液于一干燥的50ml圆底烧瓶中。 水浴蒸馏溶液，蒸出大部分溶剂后，在通风橱内直接水浴加热圆底烧瓶 [3]，并用洗耳球不断向圆底烧瓶吹气,直到完全蒸干为止备用。 2、层析柱的制备 取一支长15cm左右内径为1-1.2cm的干燥的层析柱，将其垂直固定于铁架上，底部铺上少量棉花，打开活塞。称取8g氧化铝小心倾入层析柱中，在氧化铝上铺一层棉花[4]。然后向柱内加入15ml石油醚，让溶剂浸润并流过层析柱，注意柱顶部溶剂不能干涸。待溶剂液面刚好与氧化铝表面相切时，关闭活塞，备用。 3、柱层析分离 向蒸干的粗样品中加入2ml苯使其溶解。用一长颈滴管取样，小心滴入层析柱内，注意产品不能接触柱壁[5]。 打开活塞，让溶液自然流下，待液面刚好与柱顶氧化铝表面相切时，加入2ml石油醚，用50ml干燥的锥形瓶[6]接收滴出的溶液。待溶剂液面与氧化铝表面相切时，再加入8ml或更多的石油醚，至滴出的溶液无色，关闭活塞，收集红色的番茄红素溶液(a)；打开活塞，再往层析柱中先后加入2ml及8ml的氯仿，洗至滴出的溶液无色，用另一50ml干燥的锥形瓶[6] 接收，关闭活塞，收集黄色的β-胡萝卜素溶液（b）。然后用相应温度的水浴蒸干(a)、(b)，差重法分别称出相应浓缩物的重量Wa、Wb(精确到0.0002)。 4、苏丹红(Ⅱ)工作曲线 用分析天平准确称取约5.0mg苏丹红(Ⅱ)于小烧杯中，加入少量溶剂(建议用氯仿)［B］在通风橱内水浴加热搅拌溶解，待溶液冷却至室温后全部转移到100ml的容量瓶中，用溶剂(建议用氯仿)稀释定容至刻度线，可得到50μg/ml的标准液。然后用10ml的移液管分别移取该溶液2ml、4ml、6ml、8ml、10ml于五个25ml的容量瓶中，然后加入溶剂将其稀释定容至刻度，它们浓度分别为4μg/ml、8μg/ml、12μg/ml、16μg / ml、20μg/ml。用该溶剂作参比溶液，在波长为510nm 下分别测其吸光度，以吸光度对浓度作图，可得到吸光度对浓度的标准工作曲线图及关系式。 http://202.192.18.210/yjhx/chem/%E7%BB%BC%E5%90%88%E6%80%A7%E3%80%81%E8%AE%BE%E8%AE%A1%E3%80%81%E5%88%9B%E6%96%B0%E6%80%A7%E5%AE%9E%E9%AA%8C/%E7%95%AA%E8%8C%84%E9%85%B1%E4%B8%AD%E7%95%AA%E8%8C%84%E7%BA%A2%E7%B4%A0%E5%92%8C%CE%B2%E2%80%94%E8%83%A1%E8%90%9D%E5%8D%9C%E7%B4%A0%E7%9A%84%E6%8F%90%E5%8F%96%E5%88%86%E7%A6%BB%E5%8F%8A%E5%88%86%E6%9E%90%E6%B5%8B%E5%AE%9A.html 参考文献：http://202.192.18.210/yjhx/chem/%E7%BB%BC%E5%90%88%E6%80%A7%E3%80%81%E8%AE%BE%E8%AE%A1%E3%80%81%E5%88%9B%E6%96%B0%E6%80%