样品前处理的方法

【专家解说】：第一法　薄层色谱法 1　原理 　　样品酸化后,用乙醚提取山梨酸、苯甲酸。将样品提取液浓缩,点于聚酰胺薄层板上, 展开。显色后,根据薄层板上山梨酸、苯甲酸的比移值,与标准比较定性,并可进行概略 定量。 2　试剂 2.1　异丙醇。 2.2　正丁醇。　　 2.3　石油醚：沸程：30～60℃。 2.4　乙醚: 不含过氧化物。 2.5　氨水。 2.6 6N盐酸: 取100mL盐酸,加水稀释至200mL。 2.7　无水乙醇。 2.8　聚酰胺粉：200目。 2.9　山梨酸标准溶液：精密称取0.2000g山梨酸,用少量乙醇溶解后移入100ml容量瓶中 并稀释至刻度,此溶液每毫升相当于2mg山梨酸。 2.10　苯甲酸标准溶液:精密称取0.2000g苯甲酸,用少量乙醇溶解后移入100ml容量瓶中, 并稀释至刻度,此溶液每毫升相当于2mg苯甲酸。 2.11　展开剂 2.11.1 正丁醇-氨水-无水乙醇(7：1：2)。 2.11.2 异丙醇-氨水-无水乙醇(7：1：2)。 2.12 显色剂：0.04％溴甲酚紫的50％乙醇溶液,用0.1N氢氧化钠溶液调至pH=8。 2.13 4％氯化钠酸性溶液：于4％氯化钠溶液中加少量6N盐酸酸化。 3 仪器 3.1 吹风机。 3.2 层析缸。 3.3　玻璃板：10×18cm。 3.4　微量注射器：10μL,100μL。 3.5　喷雾器。 4　操作方法 4.1　样品提取: 　　称取2.5g事先混合均匀的样品,置于25ml带塞量筒中,加0.5ml 6N盐酸酸化,用15、 10ml乙醚提取两次,每次振摇1min,将上层醚提取液吸入另一个25ml带塞量筒中,合并乙 醚提取液。用3ml4％氯化钠酸性溶液洗涤两次,静止15min,用滴管将乙醚层通过无水硫 酸钠滤入25ml容量瓶中。加乙醚至刻度,混匀。吸取10.0ml乙醚提取液分两次置于10ml带 塞离心管中,在约40℃的水浴上挥干,　加入0.10ml乙醇溶解残渣,备用。 4.2　测定 4.2.1　聚酰胺粉板的制备：称取1.6g聚酰胺粉,加0.4g可溶性淀粉,加约15ml水,研磨 3～5min,立即倒入涂布器内制成10×18cm、厚度0.3mm的薄层板两块,于室温干燥后,于 80℃干燥1h,取出,置于干燥器中保存。 4.2.2　点样：在薄层板下端2cm的基线上,用微量注射器点1μL、2μl样品液,同时各点 1μl、2μl山梨酸、苯甲酸标准溶液。 4.2.3　展开与显色：将点样后的薄层板放入预先盛有展开剂(2.11.1或2.11.2)的展开槽 内,展开槽周围贴有滤纸,待溶剂前沿上展至10cm,取出挥干,喷显色剂,斑点成黄色, 背景为蓝色。样品中所含山梨酸、苯甲酸的量与标准斑点比较定量(山梨酸、苯甲酸的比 移值依次为0.82,0.73)。 4.2.4　计算： A1 × 1000 X1 = ─────────────..........(1) m1 × 10/25 ×V2/V1×1000 式中：X1—─样品中山梨酸(苯甲酸)的含量,g/kg; 　　　A1—─测定用样品液中山梨酸(苯甲酸)的含量,mg; 　　　m1——样品质量,g; 　　　V1——加入乙醇的体积,mL; 　　　V2──测定时点样的体积,mL; 　　　10——测定时吸取乙醚提取液的体积,mL; 　　　25——样品乙醚提取液总体积,mL。 　　　注：本方法还可以同时测定果酱、果汁中的糖精。 　　　　　　　　　　　　　　第二法　气相色谱法 5　原理　　　　 　　样品酸化后,山梨酸、苯甲酸用乙醚提取浓缩后,用附氢火焰离子化检测器的气相色 谱仪进行分离测定,与标准系列比较定量。 6　试剂 6.1　乙醚。 6.2　石油醚：沸程30～60℃。 6.3　盐酸。 6.4　无水硫酸钠。 6.5　山梨酸、苯甲酸标准溶液: 精密称取山梨酸、苯甲酸各0.2000g,置于100ml容量瓶 中,用石油醚-乙醚(3：1)混合溶剂溶解后并稀释至刻度。此溶液每毫升相当于2mg山梨 酸或苯甲酸。 6.6　山梨酸、苯甲酸标准使用液：吸取适量的山梨酸、苯甲酸标准溶液,以石油醚-乙醚 (3：1)混合溶剂稀释至每毫升相当于50、100、150、200、25Oμg山梨酸或苯甲酸。 7　仪器 　　气相色谱仪：具氢火焰离子化检测器。 8　操作方法 8.1　样品提取 　　按4.1自“称取2.5g”至“加乙醚至刻度”依法操作。准确吸取5mL乙醚提取液于5mL 带塞刻度试管中,置40℃水浴上挥干,加入2ml石油醚-乙醚(3：1)混合溶剂溶解残渣,备 用。 8.2　色谱条件 8.2.1　色谱柱：玻璃柱,内径3mm,长2m,内装涂以5%DEGS+1%H3PO4固定液的60～80目 Chromosorb W AW。 8.2.2　气流速度: 载气,氮气,50ml/min(氮气和空气、氢气之比按各仪器型号不同选择 各自的最佳比例条件。) 8.2.3　温度：进样口 230℃;检测器230℃;柱温170℃。 8.3　测定 　　进样2μL标准系列中各浓度标准使用液于气相色谱仪中,可测得不同浓度山梨酸,苯 甲酸的峰高,以浓度为横坐标,相应的峰高值为纵坐标,绘制标准曲线。同时进样2μL样 品溶液,测得峰高与标准曲线比较定量。 8.4　计算 A3 × 1000 X2 = ─────────────..................(2) m2×5/25×V4/V3×1000 式中：X2──样品中山梨酸或苯甲酸的含量,g/kg; 　　　A3——测定用样品液中山梨酸或苯甲酸的含量,μg; 　　　V3——加入石油醚—乙醚(3：1)混合溶剂的体积,mL； 　　　V4─—测定时进样的体积,μL； 　　　m2──样品的质量,g; 　　　 5─—测定时吸取乙醚提取液的体积,mL; 　　　25──样品乙醚提取液的总体积,mL。 　　由测得苯甲酸的量乘以1.18,即为样品中苯甲酸钠的含量。 http://www.21food.cn/html/biaozhun/84.htm2.山梨酸、苯甲酸的气相色谱测定原理： 样品经酸化后，用乙醚提取山梨酸和苯甲酸，再用带氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定，然后与标准系列进行比较定量。 仪器和试剂 ： （1）乙醚、石油醚：沸程30～60 ℃ （2）山梨酸、苯甲酸标准溶液：用石油醚-乙醚（3：1）混合溶剂配制溶液每毫升相当2mg山梨酸或苯甲酸。 （3）山梨酸、苯甲酸标准使用液：吸取适量山梨酸、苯甲酸标准溶液，以石油醚-乙醚（3：1）混合溶剂稀释至每毫升相当于50、100、150、200、250µg山梨酸或苯甲酸。 （4）仪器：气相色谱仪，带氢火焰离子化检测器 操作步骤 (1)样品的处理：称取2.5g事先混合均匀的样品，置于 25mL带塞试管中，加0.5mL 6mol／L HCI酸化，用15、10mL乙醚提取2 次，每次振摇1min，将上层醚提取液吸入另一个25mL一带塞试管中，合并乙醚提取液。用 3mL 4％氯化钠酸性溶液洗涤2次，静置15min，用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤入25mL容量瓶中。加乙醚至刻度，混匀。准确吸取5mL乙醚提取液于5mL 带塞刻度试管中，置40℃水浴上挥干，加入2mL石油醚-乙醚（3：1）混合溶液溶解残渣，备用。 (2)色谱参考条件 色谱柱：玻璃柱，内径3mm，长2m， 气流速度：载气、氮气，50mL／min（氮气和空气、 氢气比按各仪器型号不同选择各自的最 佳比例条件）。 温度：进样口 230 ℃ ，检测器230 ℃ ，柱温170 ℃ 。 （3）测定： 进样2µL标准系列中各浓度标准使用液于气相色谱仪中，可得不同浓度山梨酸、苯甲酸的峰面积，以浓度为横坐标，相应峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线。同时进样2µL样品溶液，测得峰面积可从标准曲线相应的山梨酸、苯甲酸的浓度。结果计算 式中： X——样品中山梨酸或苯甲酸的含量，g／kg； ρ ——标准曲线上查得山梨酸或苯甲酸的量，μg/mL； V1——加入石油醚-乙醚(3+1)混合溶剂的体积，mL： m——样品的质量，g； 5——测定时吸取乙醚提取液的体积，mL； 25——样品乙醚提取液的总体积，mL。说明及注意事项： 1、由测得苯甲酸的量乘以相对分子质量比1.18，即为样品中苯甲酸钠含量。 2、由测得山梨酸的量乘以相对分子质量比1.34，即为样品中山梨钾的含量。 3、通过无水硫酸钠层过滤后的乙醚提取液应达到去除水分的目的，否则5mL乙醚提取液在40 ℃挥去乙醚后仍残留少量水分会影响l测定结果，这时必须将残留水分挥干，但会析出极少量白色氯化钠，当出现此情况时应搅松残留的无机盐后加入石油醚-乙醚（3：1）振摇，取上清液进样，否则氯化钠覆盖了部分山梨酸、苯甲酸，使定结果偏低。 http://www.foodmate.net/lesson/312/6.ppt