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T-RFLP分析厌氧真菌传代频率对共存产甲烷菌菌群的影响

来源:论文学术网
时间:2024-08-18 18:04:06
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T-RFLP分析厌氧真菌传代频率对共存产甲烷菌菌群的影响【摘要】:【目的】建立瘤胃产甲烷菌T-RFLP多样性分析方法,并研究厌氧真菌与产甲烷菌共培养液在不同时间传代对共存产甲烷菌菌

【摘要】:【目的】建立瘤胃产甲烷菌T-RFLP多样性分析方法,并研究厌氧真菌与产甲烷菌共培养液在不同时间传代对共存产甲烷菌菌群的影响。【方法】利用产甲烷菌mcrA基因特异性引物PCR扩增后,选择合适内切酶对扩增产物进行内切,分析内切后末端片段长度多态性,测定共培养液在不同传代频率时共存产甲烷菌多样性的变化。【结果】利用MspI内切酶分析发现,末端片段长度约为470bp的产甲烷菌为共培养液中的优势甲烷菌,共培养液传代至第15代时,片段长度约为130bp和200bp的产甲烷菌也成为共培养中的优势菌株;比较发现,TaqI能更好地内切共培养液中甲烷菌mcrA基因序列,瘤胃内容物及3d传代共培养液中产甲烷菌主要为末端片段长度约为70、100、200、270、300、330和470bp的菌株,共培养液在体外传代培养过程中,末端片段长度约为70、100、270和470bp的产甲烷菌变化更为显著。TaqI比较分析不同传代频率(3、5和7d)对共培养液中产甲烷菌菌群结构的影响表明,3d传代的共培养液中产甲烷菌菌群与瘤胃内容物较为相似,而5d和7d传代的共培养液中产甲烷菌菌群间差异较小,但与瘤胃内容物差异较大,导致不同传代频率的共培养液中产甲烷菌菌群间显著差异的最主要菌株为末端片段长度约为100bp的产甲烷菌,其次为末端片段长度约为70bp和270bp的产甲烷菌。【结论】利用建立的快速可行的瘤胃产甲烷菌T-RFLP方法分析表明,传代频率显著影响厌氧真菌与产甲烷菌共培养液中产甲烷菌的菌群结构,3d传代共培养液内产甲烷菌菌群与瘤胃内容物更相似。 【作者单位】: 南京农业大学消化道微生物研究室;
【关键词】厌氧真菌 产甲烷菌 末端限制性片段长度多态性
【基金】:国家自然科学基金青年基金项目(No.31101735) 中央高校基本科研业务费专项资金项目(No.KYZ201312)
【分类号】:Q93
【正文快照】: 全球气候变暖现象越来越引起人们的关注,并传代时间对厌氧真菌与产甲烷菌共培养体系中产成为研究热点。IPCC[1]报告指出,甲烷是第二大温甲烷菌会产生怎样的影响尚不清楚。室气体,2005年大气中甲烷浓度达到1 774 ppb,甲基辅酶M还原酶(MCR)是产甲烷菌生成甲已经远远超过了过去65

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