油气田土壤甲烷氧化菌实时荧光定量PCR检测技术的建立与应用

【摘要】：【目的】建立快速检测甲烷氧化菌含量的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术,用于油气微生物勘探。【方法】以含有甲烷氧化菌功能基因pmoA片段的重组质粒为标准品,优化实验条件,建立标准曲线,进行敏感性、重复性和特异性评价,并将该技术用于实际样品的检测。【结果】该技术标准曲线的相关系数R2为0.999 9,扩增效率为99.976%,检测范围为3.897×101-3.897×109 copies/μL,检出限约为40 copies/μL,重复性实验中CT值的变异系数优于3%,对12种非甲烷氧化菌均没有扩增,显示该技术具有很好的敏感性、重复性和特异性。利用该技术对气田、油田和非油气田土样进行了检测,发现气田具有明显的异常高值。【结论】为油气田的勘探建立了一种高效、特异、灵敏、准确的甲烷氧化菌荧光定量PCR检测技术,同时为其它指示菌检测技术的建立提供了参考。 【作者单位】： 中国地质科学院研究生院;中国地质科学院水文地质环境地质研究所;河北省地下水污染机理与修复重点实验室;
【关键词】： 甲烷氧化菌 实时荧光定量PCR pmoA基因 油气田土壤
【基金】：地质调查项目(No.1212011120268) 中国地质科学院水文地质环境地质研究所基本科研业务费项目(No.SK201214)
【分类号】：P618.13
【正文快照】： 在油气藏压力的驱动下,油气藏的轻烃气持续向地表作垂直扩散和运移,土壤中的专性微生物以轻烃气作为唯一碳源在油气藏正上方的地表土壤中非常发育,形成微生物异常,通过检测微生物异常可以预测下伏油气藏的存在[1-2]。向上运移的轻烃气中含量最多的是甲烷,甲烷氧化菌是以甲烷为

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