一株嗜盐产甲烷菌的分离、生物学特性、系统发育分析及产甲烷活性污泥利用CO的初步研究

【摘要】：从沼气所提供的鸭湖(咸水湖)沉积物中进行产甲烷菌分离。对得到的一株产甲烷菌MQ-4进行了生理生化和16S rDNA分析。 MQ-4菌株为革兰氏阴性菌、不运动、球状、直径约1μm。菌落圆形湿润，从无色透明到黄色。该菌能利用甲酸钠及H_2／CO_2产甲烷，不利用甲醇、三甲胺。最适生长温度35℃，最适pH7.0，最适盐浓度4％。 用PCR技术扩增了MQ-4菌株的16S rDNA序列，并对其进行了克隆和测序。该16S rDNA序列在NCBI进行BLAST结果表明，所获得的同源序列为产甲烷菌16SrDNA序列，其中相似性最高的为甲烷带状菌属的菌株，其中MQ-4与Methanoculleus marisnigri，Methanoculleus submarinus，Methanoculleus chikugoensis的同源性最高，均为98％。在此基础上以Methanogenium cariaci DSM 1497的16S rDNA序列作为外群种，构建系统发育树。采用Clustalx(1.8)进行同源性排列，再运用Phylip算出其NJ树，并用Bootstrap进行检验(替代率为1000)发育树。MQ-4菌株与Methanoculleus marisnigri，Methanoculleus submarinus，Methanoculleus chikugoensis都聚在同一个分支里，与三种菌的亲缘关系都很近，从进化树上还无法判断MQ-4菌株属于哪个种。种水平上鉴定 【关键词】：甲烷袋状菌属 生物学特性 16S rDNA 系统发育分析 CO 生物转化 CH_4 Co~(2+)、Ni~(2+)、Fe~(3+) 产甲烷活性污泥
【学位授予单位】：四川大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：X172
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 引言8-10
• 第一章 一株嗜盐产甲烷菌的分离、生物学特性及系统发育分析的研究10-32
• 1 材料与方法10-23
• 1.1 实验材料10-13
• 1.1.1 菌株与质粒10-11
• 1.1.2 主要药品与试剂11
• 1.1.3 培养基和溶液11-13
• 1.2 实验方法13-23
• 1.2.1 产甲烷菌的富集培养14
• 1.2.2 产甲烷菌的分离,纯化14-15
• 1.2.3 菌株的分类15-23
• 1.2.3.1 形态特征15-16
• 1.2.3.2 底物范围16
• 1.2.3.3 生长条件测定16-17
• 1.2.3.4 16S rDNA分子鉴定实验17-23
• 2 结果23-29
• 2.1 形态特征23-24
• 2.2 生理学特性结果24-26
• 2.2.1 底物利用特征24
• 2.2.2 生长条件24-26
• 2.3 菌株16S RDNA结果26-29
• 2.3.1 DNA提取、16S rDNA PCR扩增26-27
• 2.3.2 重组质粒的构建和鉴定27
• 2.3.3 MQ-4菌株16S rDNA测序结果及系统发育的分析27-29
• 3 讨论29-30
• 3.1 氧化还原电位对产甲烷菌生长的影响29
• 3.2 MQ-4菌株的生长特点29
• 3.3 MQ-4的分类29-30
• 参考文献：30-32
• 第二章 产甲烷活性污泥利用CO的初步研究32-38
• 1 材料和方法32-33
• 1.1 材料32
• 1.2 方法32-33
• 1.2.1 产甲烷活性污泥的培养32
• 1.2.2 实验设置32-33
• 1.2.3 分析与测定33
• 1.2.4 显微镜镜检33
• 2 结果33-36
• 2.1 产甲烷活性污泥对CO的转化33-34
• 2.2 CO~(2+),NI~(2+),FE~(3+)对产甲烷活性污泥CO转化的影响34-36
• 2.4 镜检结果36
• 3 讨论36-37
• 3.1 产甲烷活性污泥对CO的转化36
• 3.2 CO~(2+),NI~(2+),FE~(3+)对CO产甲烷的影响36-37
• 参考文献37-38
• 文献综述38-57
• 致谢57-58
• 论文发表情况58-59

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