糙皮侧耳秸秆分解优化菌株选育研究

【摘要】： 糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)具有很强的木质纤维素降解能力,自身能够合成并分泌多种木质纤维素降解酶。原生质体紫外诱变育种是食用菌遗传育种研究中一种有效的方法。因此以糙皮侧耳菌株为出发菌株,利用原生质体诱变技术,选育出能够高效分解秸秆的菌株,对开发利用富含木质纤维素的秸秆资源具有重要意义。 首先对影响其原生质体制备和再生的诸多因素进行了初步探索,建立了糙皮侧耳原生质体制备和再生的优化系统：1%纤维素酶与1%蜗牛酶体积比为1.5：1混合,以0.6mol/L MgSO4作渗透压稳定剂配制酶液,作用于生长96 h的糙皮侧耳菌丝,酶解温度30℃,酶解3 h,再生渗透压稳定剂为甘露醇,再生培养基为综合马铃薯培养基。在此优化系统下,原生质体的得率和再生率都得到了极大程度的提高,分别达到20.60×104个/mg和3.7%。 经过原生质体紫外诱变处理,筛选到一株木质素、纤维素、半纤维素高降解活性菌株08P217,其木质素酶、纤维素酶、半纤维素酶酶活性显著高于出发菌株,且在以秸秆为主要栽培基质的出菇实验中较出发菌株增产率达10.3%。经酯酶同工酶分析,所筛选的菌株08P217的酯酶同工酶谱不同于出发菌株的酶谱带,二者之间存在较大差异。从而证明了08P217是一株对秸秆的降解、转化、利用能力发生了显著变化的优良变异菌株。 通过对08P217的优化栽培研究,综合考虑生物学效率与栽培原料价格,确定其栽培基质的最适宜麦秸添加量为40%。 对菌株08P217进行秸秆栽培料试管长速稳定性检测、木质素、纤维素、半纤维素降解率稳定性检测、生物学效率稳定性检测。结果表明08P217较稳定,是可以进行推广的优良菌株。 【关键词】：糙皮侧耳 菌株选育 原生质体诱变 秸秆分解
【学位授予单位】：河北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：S646.14
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-12
• 第1章 文献综述12-20
• 1.1 引言12
• 1.2 糙皮侧耳概述12-13
• 1.3 食用菌育种技术13-15
• 1.3.1 野生驯化13-14
• 1.3.2 单孢分离14
• 1.3.3 杂交育种14
• 1.3.4 诱变育种14-15
• 1.3.5 原生质体融合技术15
• 1.3.6 转基因技术15
• 1.4 酯酶同工酶技术15-16
• 1.5 秸秆资源综合利用16-18
• 1.5.1 秸秆资源简介16
• 1.5.2 现有秸秆资源的主要利用方式16-18
• 1.6 研究目的、意义、研究内容及特点18-19
• 1.6.1 研究目的18
• 1.6.2 研究意义18
• 1.6.3 研究内容及特点18-19
• 1.7 技术路线19-20
• 第2章 糙皮侧耳原生质体制备与再生条件的优化研究20-29
• 2.1 引言20
• 2.2 实验材料20-21
• 2.2.1 供试菌株20
• 2.2.2 培养基20
• 2.2.3 实验试剂20-21
• 2.2.4 主要仪器设备21
• 2.3 实验方法21-23
• 2.3.1 原生质体制备和再生的基本方法21-22
• 2.3.2 糙皮侧耳原生质体的制备及再生条件的优化22-23
• 2.4 实验结果与分析23-28
• 2.4.1 原生质体的形成23-24
• 2.4.2 酶种类对原生质体得率的影响24
• 2.4.3 菌龄对原生质体得率的影响24-25
• 2.4.4 渗透压稳定剂种类对原生质体得率的影响25
• 2.4.5 酶解时间对原生质体得率的影响25
• 2.4.6 酶解温度对原生质体得率的影响25-26
• 2.4.7 渗透压稳定剂对原生质体再生的影响26
• 2.4.8 再生培养基对原生质体再生的影响26
• 2.4.9 原生质体制备与再生最佳条件的正交实验26-28
• 2.5 小结28-29
• 第3章 糙皮侧耳原生质体紫外诱变29-32
• 3.1 引言29
• 3.2 实验材料29-30
• 3.2.1 供试菌株29
• 3.2.2 培养基29
• 3.2.3 实验试剂29
• 3.2.4 主要仪器设备29-30
• 3.3 实验方法30
• 3.3.1 原生质体的制备30
• 3.3.2 紫外线对原生质体的诱变效应及紫外线诱变剂量的选择30
• 3.3.3 原生质体的紫外诱变30
• 3.4 实验结果与分析30-31
• 3.4.1 原生质体紫外线诱变曲线及紫外线诱变剂量的选择30-31
• 3.4.2 原生质体的紫外诱变31
• 3.5 小结31-32
• 第4章 再生变异株中秸秆分解优良菌株的筛选32-44
• 4.1 引言32
• 4.2 实验材料32-33
• 4.2.1 供试菌株32
• 4.2.2 培养基32
• 4.2.3 主要仪器设备32
• 4.2.4 数据处理软件32-33
• 4.3 实验方法33-38
• 4.3.1 糙皮侧耳秸秆分解菌株的初筛33
• 4.3.2 糙皮侧耳秸秆分解菌株的复筛33
• 4.3.3 复筛菌株木质素,纤维素,半纤维素酶活比较33-36
• 4.3.4 复筛菌株木质素,纤维素,半纤维素降解率比较36-38
• 4.4 实验结果与分析38-43
• 4.4.1 糙皮侧耳秸秆降解菌株的初筛38-39
• 4.4.2 糙皮侧耳秸秆降解菌株的复筛39-41
• 4.4.3 复筛菌株木质素,纤维素,半纤维素酶活比较41-42
• 4.4.4 复筛菌株木质素,纤维素,半纤维素降解率比较42-43
• 4.5 小结43-44
• 第5章 再生变异株中秸秆栽培优良菌株的筛选44-50
• 5.1 引言44
• 5.2 实验材料44-45
• 5.2.1 供试菌株44
• 5.2.2 培养基44
• 5.2.3 主要仪器设备44
• 5.2.4 数据处理软件44-45
• 5.3 实验方法45
• 5.4 实验结果与分析45-49
• 5.4.1 生长周期的比较45-47
• 5.4.2 生物学效率的比较47-48
• 5.4.3 子实体农艺性状的比较48-49
• 5.5 小结49-50
• 第6章 再生变异株的鉴定50-54
• 6.1 引言50
• 6.2 实验材料50-51
• 6.2.1 供试菌株50
• 6.2.2 主要仪器设备50
• 6.2.3 溶液配制50-51
• 6.3 实验方法51-52
• 6.3.1 酯酶提取液的制备51
• 6.3.2 制胶及电泳51
• 6.3.3 染色51-52
• 6.3.4 观察与记录52
• 6.4 实验结果与分析52-53
• 6.5 小结53-54
• 第7章 再生变异株08P217优化栽培研究54-58
• 7.1 引言54
• 7.2 实验材料54
• 7.2.1 供试菌株54
• 7.2.2 培养基54
• 7.2.3 主要仪器设备54
• 7.2.4 数据处理软件54
• 7.3 实验方法54-55
• 7.4 实验结果分析55-57
• 7.4.1 不同麦秸添加量栽培料满袋天数比较55-56
• 7.4.2 不同麦秸添加量栽培料生物学效率比较56-57
• 7.5 小结57-58
• 第8章 再生变异菌株08P217遗传稳定性研究58-62
• 8.1 引言58
• 8.2 实验方法58
• 8.2.1 组织分离58
• 8.2.2 秸秆栽培料试管长速稳定性检测58
• 8.2.3 木质素、纤维素、半纤维素降解率稳定性检测58
• 8.2.4 生物学效率稳定性检测58
• 8.3 实验结果与分析58-60
• 8.3.1 秸秆栽培料试管长速稳定性检测58-59
• 8.3.2 木质素、纤维素、半纤维素降解率稳定性检测59-60
• 8.3.3 生物学效率稳定性检测60
• 8.4 小结60-62
• 第9章 结论62-63
• 参考文献63-67
• 致谢67-68
• 攻读学位期间取得的科研成果68

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