DNA-三苯甲烷类染料体系的RLS的研究与应用

【摘要】：本论文在查阅大量文献的基础上，根据实验室的实验条件，选择荧光共振光散射光谱法研究脱氧核糖核酸(DNA)与碱性三苯甲烷类有机染料之间的相互作用前后的荧光共振光散射光谱(RLS)特征，根据RLS信号的改变值与DNA的浓度呈正比的特点，建立了四种测定纳克级DNA的新方法。这些方法具有快速、灵敏等特点，应用于鱼精DNA(fsDNA)和小牛胸腺DNA(ctDNA)的定量分析，结果令人满意。 本论文共分为四章。 第一章 研究了碱性三苯甲烷类有机染料灿烂绿(BG)与DNA在弱酸性条件下的RLS特征，考察了影响因素和最佳反应条件，研究表明，灿烂绿在三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)缓冲溶液中，均只有较弱的共振光散射信号。在pH=6.35的Tris-HCl缓冲溶液中，加入DNA以后，在332nm处的共振光散射信号明显增强，且共振光散射强度增加值与加入的DNA的浓度呈良好的线性关系。据此建立了一种测定DNA的新方法，线性范围为0.13～3.50mg／L，相关系数为0.9918，最低检出限为30.0μg／L，用于fsDNA的测定结果令人满意。 第二章 研究了碱性三苯甲烷类有机染料维多利亚蓝B(VB-B)与DNA在弱碱性条件下的RLS特征，考察了体系的影响因素和最佳反应条件，建立了一种测定DNA的新方法。研究表明，在pH=9.81的Tris-HCl缓冲溶液中，维多利亚蓝B与DNA相互作用使荧光共振光散射信号在355nm处增强，其信号增强值与加入的DNA的浓度呈良好的线性关系，线性范围为0.11～3.00mg／L，相关系数为0.9978，检出限为21.5μg／L，用于fsDNA的测定结果令人满意。 第三章 研究了利用碱性三苯甲烷类有机染料甲基紫6B(MV-6B)测定DNA的最佳条件，探索了体系在pH=2.36的Tris-HCl缓冲溶液中的共振光散射特征，并考察了影响因素，建立了一种测定fsDNA和ctDNA的新方法。方法的线性范围分别为0～1.00mg／L、0-1.50mg／L，相关系数分别为0.9993、0.9997，检出限分别为15.3μg·L~(-1)，12.2μg·L~(-1)，用于fsDNA、ctDNA的合成样品 的测定结果令人满意。 第四章研究了利用碱性三苯甲烷类有机染料新品红(NM)定 量分析DNA的最佳条件，探索了体系在pH为0.85的Tris一Hcl缓 冲溶液中，新品红与DNA分子作用后共振光散射在314nln处增强， 其强度增加值与DNA的浓度呈线性关系，据此，建立了一种测定 DNA的共振光散射法。该方法线性范围分别为0.12一6.00 mg/L， 0一7.oomg/L，相关系数分别为0.9984，0.9987，检出限分别为18.3 林gL一’、21.8林gL’’，用于DNA合成样品的测定获得了满意的结果。 同时，对该反应机理进行了探讨，并用紫外一可见光谱求出了其形 成常数。 【关键词】：脱氧核糖核酸 共振光散射光谱 灿烂绿 维多利亚蓝B 甲基紫6B 新品红 三苯甲烷类染料
【学位授予单位】：湘潭大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：O657.3
【目录】：

• 引言23-34
• 第一章 灿烂绿共振光散射法测定DNA34-42
• 第一节 实验部分35
• 第二节 结果与讨论35-40
• 第三节 样品分析40-41
• 第四节 机理探讨41-42
• 第二章 维多利亚蓝B共振光散射法测定DNA42-49
• 第一节 实验部分42-43
• 第二节 结果与讨论43-47
• 第三节 样品分析47-48
• 第四节 机理探讨48-49
• 第三章 甲基紫6B共振光散射法测定DNA49-58
• 第一节 实验部分49-50
• 第二节 结果与讨论50-55
• 第三节 样品分析55-56
• 第四节 机理探讨56-58
• 第四章 新品红共振光散射法测定DNA58-66
• 第一节 实验部分58-59
• 第二节 结果与讨论59-63
• 第三节 样品分析63-64
• 第四节 机理探讨64-66
• 参考文献66-75
• 攻读硕士学位期间发表的论文75-76
• 致谢76

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