瘤胃总甲烷菌实时荧光定量PCR方法的构建

【摘要】：试验构建了瘤胃总甲烷菌实时荧光绝对定量PCR的标准品及标准曲线用于总甲烷菌的定量测定,并提取瘤胃微生物总DNA,以甲烷菌特异性引物进行PCR扩增,回收纯化PCR产物,与pBS-T载体连接并转化到大肠杆菌,再用氨苄西林培养基筛选阳性重组质粒,提取含目的片段质粒DNA,通过PCR及测序鉴定重组质粒。根据OD值确定浓度,将梯度稀释的质粒作为模板,进行荧光定量PCR反应并作出标准曲线。结果表明:所构建的标准曲线具有很高的相关性(R2=0.992),并获得了高扩增效率产物。 【作者单位】： 内蒙古农牧业科学院生物中心;日本国家农业生物资源研究所动物科学研究组;
【关键词】： 瘤胃甲烷菌 实时荧光定量PCR 标准品质粒 标准曲线
【基金】：中日合作项目“关于中国.亚洲东部区域反刍家畜生产状况利用及甲烷排放量的研究”
【分类号】：S852.6
【正文快照】： 甲烷菌是广泛存在于反刍动物瘤胃内的一类严格厌氧古细菌,它的生成损耗2%~12%的饲料能量,也是被公认的与全球气候变化密切相关的温室气体,因此减少家畜体内甲烷的生成不仅可以提高饲料能量利用率,增加动物的生产性能,而且对控制温室效应、改善环境有重要意义。MCR(methyl coen

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