三苯基甲烷类染料氧化酶基因(tpmD)在大肠杆菌中的无诱导表达

【摘要】：为了解决嗜水气单胞菌DN322对鱼类的潜在致病性问题,有必要克隆表达该菌的三苯基甲烷染料脱色酶基因tpmD.通过PCR方法获得该基因,并与脱色希瓦氏菌S12的NAD(P)H脱氢酶基因启动子和用于荧光标记的编码CCPGCC的碱基序列融合,将有启动子和无启动子的融合基因片段分别连接到质粒pMD18-T中,转化大肠杆菌E.coliDH5α和E.coliBL21.结果发现,有启动子的融合基因能被E.coli在不加诱导物IPTG的条件下高效正确表达,脱色酶活性甚至超过基因供体菌DN322.将上述两株大肠杆菌工程菌株在自然水体中进行孔雀石绿污染小试处理,60d内在每个350mL反应体系中累积共投加大于10000mg的孔雀石绿,脱色率一直保持在92%以上;细菌数量最后增加了5～10倍.研究结果证明,基因工程菌在不加营养物的条件下也有很强的脱色活性和长期的存活能力;在tpmD基因3’端加入的用于螯合双砷荧光染料的18bp编码氨基酸碱基序列不影响此基因的表达和酶的脱色活性,这将赋予此工程菌可示踪性. 【作者单位】： 中国科学院南海海洋研究所;广东省微生物研究所菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物研究所;中国科学院研究生院;广东省科技图书馆;
【关键词】： 嗜水气单胞菌脱色酶基因(tpmD) 三苯基甲烷染料 希瓦氏菌启动子 无诱导表达
【基金】：国家高技术研究发展计划(863)项目(No.2006AA06Z322) 国家自然科学基金(No.30800031) 广东省科技计划项目(No.2007A020903001) 广东省科技攻关项目(No.2007A020300007) 广东省科学院人才基金项目(No.200601) 野外科学实验站基金项目(No.sytz200710)~~
【分类号】：Q78
【正文快照】： 1引言(Introduction)三苯基甲烷类染料孔雀石绿及其脱甲基代谢产物无色孔雀石绿因具有高毒性、高残留、高致癌、高致畸、致突变等作用而引起了世人的广泛关注(任随周等,2006a).鉴于孔雀绿在自然环境中难以降解并且能够在动物体内长期残留,如何消除孔雀绿在环境中的残留污染已

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