瘤胃总甲烷菌实时荧光定量PCR方法的构建

【摘要】：试验构建了瘤胃总甲烷菌实时荧光绝对定量PCR的标准品及标准曲线用于总甲烷菌的定量测定,并提取瘤胃微生物总DNA,以甲烷菌特异性引物进行PCR扩增,回收纯化PCR产物,与pBS-T载体连接并转化到大肠杆菌,再用氨苄西林培养基筛选阳性重组质粒,提取含目的片段质粒DNA,通过PCR及测序鉴定重组质粒。根据OD值确定浓度,将梯度稀释的质粒作为模板,进行荧光定量PCR反应并作出标准曲线。结果表明:所构建的标准曲线具有很高的相关性(R2=0.992),并获得了高扩增效率产物。 【作者单位】： 内蒙古农牧业科学院生物技术中心;日本国家农业生物资源研究所动物科学研究组;
【关键词】： 瘤胃甲烷菌 实时荧光定量PCR 标准品质粒 标准曲线
【基金】：中日合作项目“关于中国·亚洲东部区域反刍家畜生产状况利用及甲烷排放量的研究”
【分类号】：S852.2
【正文快照】： 甲烷菌是广泛存在于反刍动物瘤胃内的一类严格厌氧古细菌,它的生成损耗2%～12%的饲料能量,也是被公认的与全球气候变化密切相关的温室气体,因此减少家畜体内甲烷的生成不仅可以提高饲料能量利用率,增加动物的生产性能,而且对控制温室效应、改善环境有重要意义。MCR(methyl cen

您可以在本站搜索以下学术论文文献来了解更多相关内容

低温沼气功能菌群的产甲烷菌分析    丁建南;田晓娟;张国华;黄黄;黄江丽;

北方沼气池越冬技术的分析与探讨    袁长波;姚利;刘英;李彦;刘兆辉;王艳芹;张昌爱;

农作物秸秆的厌氧消化试验研究    李连华;马隆龙;袁振宏;刘晓风;廖翠萍;

北方低温沼气发酵技术研究及展望    赵光;马放;魏利;蔡宏;王哲;

自然湿地土壤产甲烷菌和甲烷氧化菌多样性的分子检测    佘晨兴;仝川;

低温沼气发酵微生物区系的筛选及其宏基因组文库构建    成晓杰;仇天雷;王敏;张姝;蔡金国;高俊莲;

温度对甲烷产生和氧化的影响    丁维新,蔡祖聪

利用实时定量PCR对瘤胃甲酸甲烷杆菌定量方法的建立与应用    赵玉华;王加启;

瘤胃总甲烷菌实时荧光定量PCR方法的构建    李长青;金海;栗原光规;

实时荧光定量PCR对瘤胃纤维分解菌定量方法的构建    陈小连;王佳堃;刘建新;

猪附红细胞体实时荧光定量PCR检测方法的建立    朱绍辉;吴延功;单虎;王志亮;姜同泉;孙承英;赵永刚;

非洲猪瘟病毒TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立    李维彬;蒋正军;王玉炯;龚振华;许崇波;郭福生;郑增忍;

玉屏风散对小鼠β防御素-2基因表达的影响    王秋菊;曹立亭;万向;马跃;

土壤镰孢菌Real-Time QPCR定量方法的建立及应用    魏巍;许艳丽;刘金波;李春杰;韩晓增;李文滨;李淑娴;

一种快速定性和定量检测发酵乳中L.rhamnosus的方法    包秋华;张家超;李梅花;赵文静;张和平;

荧光定量PCR技术应用综述    徐婷婷;

SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测猪流行性腹泻病毒方法的建立及应用    王金良;郭显坡;魏凤;沈志强;

萎蔫短小杆菌糖甜菜致病变种的实时荧光定量PCR检测    李博;李金庆;尹燕妮;郭坚华;

实时荧光定量PCR检测TCR VγI-Jγ基因重排标准品的构建    江小工;徐兵;许文娟;李冰;

建立实时荧光定量PCR检测TREC的方法研究    孙竞;阴继霞;许文娟;周荣;孟凡义;刘启发;徐丹;周淑芸;李扬秋;

小鼠Nurrl基因实时荧光定量PCR检测方法的建立    吴云成;蔡友庆;赵永波;费俭;

犏牛HSFY2基因实时荧光定量PCR方法的建立    王侠;钟金城;陈思;廖伟旋;

TaqMan探针检测转基因大豆含量方法的建立及应用    黄俊明;李文立;胡帅尔;杨杏芬;陈海珍;谭剑斌;

多重实时定量PCR鉴别诊断猪传染性胸膜肺炎和猪圆环病毒Ⅱ型方法的建立    谢芝勋;黄琦;庞耀珊;刘加波;邓显文;谢志勤;谢丽基;

西尼罗病毒荧光定量RT-PCR检测技术    史利军;尹惠琼;吕茂民;孙宇;章金刚;

LUX~(TM)引物荧光定量PCR检测鹅细小病毒方法的建立与初步应用    毕建敏;朱瑞良;田夫林;

实时荧光定量PCR技术快速定量检测H3N2亚型猪流感病毒    陈艳;张春明;乔传玲;杨焕良;张飞;吴运谱;辛晓光;陈化兰;

类胡萝卜素合成途径相关酶基因在结球白菜不同组织中的表达研究    戚佳妮;于拴仓;张凤兰;

国内外同类技术综合比较    

诊断试剂市场硝烟乍起    樊小业

德国两种非典诊断技术进入临床试验    李雪墨

抗戾饮对呼吸道冠状病毒感染模型影响的实验研究    孙立

灵芝多糖抗皮肤衰老及相关基因表达的研究    谢韶琼

抗人FXYD3单克隆抗体的制备应用及蓖麻毒素细胞毒作用的实验研究    马焕先

立氏立克次体外膜蛋白B基因的应用研究    牛东升

犬瘟热免疫层析试纸及荧光定量PCR诊断方法的建立与评价    苏建青

p53促凋亡刺激蛋白在非小细胞肺癌中表达的研究    李士军

棉铃虫对拟除虫菊酯氧化代谢抗性的生化与分子机理    杨亦桦

脊髓性肌萎缩症SMN基因检测及其表达的研究    卢丽萍

热休克蛋白47在病理性瘢痕生成中的作用机制的探讨    陈俊杰

早期肾癌肾部分切除术安全切除边距的选择    沈弋桢

HBV携带者血清HBVDNA及其标志物与肝组织cccDNA相关性的研究    吴锋

抗乙型肝炎病毒药物的筛选和研究    周侠

放大内镜下胃黏膜微细结构改变与病理组织学和hTERTmRNA表达的关系及其意义    王尊松

Real Time PCR评价血液制品中指示病毒灭活去除效率的模型建立    黄亮

载体介导siRNA体内抑制鼠乳腺癌细胞KLK6基因表达及功能研究    季丙元

实时定量PCR检测复发性阿弗他溃疡患者中的人类疱疹病毒5型和8型的潜伏    尚巍

湖泊浮游植物动态及微囊藻监测技术研究    徐瑶

Survivin mRNA在膀胱移行细胞癌患者手术前后尿脱落细胞中的表达及意义    孙健

肝细胞癌中缺氧诱导因子-1α的表达及临床意义    周新军

祛风解痉类方药干预过敏性哮喘小鼠arg-1基因调控研究    马小鑫