关于征求《水质 7种苯氧羧酸类除草剂的测定 高效液相色谱法（征求意见稿）》的通知

关于征求《水质 浮游植物的测定 显微镜计数法(征求意见稿)》
等2项国家生态环境标准意见的通知　　为贯彻《中华人民共和国环境保护法》，规范生态环境监测工作，我部编制了《水质 浮游植物的测定 显微镜计数法》等2项国家生态环境标准征求意见稿。按照国家生态环境标准制修订工作规则要求，现公开征求意见(征求意见稿及编制说明，可登录我部网站“意见征集”栏目检索查阅)。
　　各有关单位和个人均可提出意见和建议。请将意见建议书面反馈我部，并注明联系人及联系方式，电子文档同时发送至联系人邮箱。征求意见截止时间为2021年4月23日。
　　联系人：生态环境部监测司曹宇
　　地址：北京市东城区东安门大街82号
　　邮编：100006
　　附件：1.水质 浮游植物的测定 显微镜计数法(征求意见稿)
　　2.《水质 浮游植物的测定 显微镜计数法(征求意见稿)》编制说明
　　3.水质 7种苯氧羧酸类除草剂的测定 高效液相色谱法(征求意见稿)
　　4.《水质 7种苯氧羧酸类除草剂的测定 高效液相色谱法(征求意见稿)》编制说明
　　生态环境部办公厅
　　2021年3月24日　　(此件社会公开)
　　水质 7 种苯氧羧酸类除草剂的测定 高效液相色谱法
　　(征求意见稿)　　警告：实验中使用的有机溶剂、标准溶液具有一定的毒性和挥发性，试剂配制和样品前处理过 程应在通风橱内进行；操作时应按要求佩戴防护器具，避免接触皮肤和衣物。
　　1 适用范围
　　本标准规定了测定水中苯氧羧酸类除草剂的高效液相色谱法。
　　本标准适用于地表水、地下水、生活污水、工业废水和海水中 3,6-二氯-2-甲氧基苯甲酸(麦草 畏)、 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、2-甲基-4-氯苯氧乙酸(MCPA)、2-(2,4-二氯苯氧基) -丙酸(2,4-DP)、 2,4,5-三氯苯氧乙酸(2,4,5-T)、4-(2,4-二氯苯氧基)-丁酸(2,4-DB)和 2-(2,4,5-三氯苯氧基)丙酸(2,4,5-TP)等 7 种苯氧羧酸类除草剂的测定。
　　当取样量为 5.0 ml，定容体积为 1.0 ml 时，方法检出限为 0.5µg/L——0.8 µg/L，测定下限为 2.0 µg/L——3.2µg/L。当取样量为 250 ml，定容体积为 1.0 ml 时，方法检出限为 0.04 µg/L——0.06 µg/L， 测定下限为 0.16µg/L——0.24µg/L。详见附录 A。
　　2 规范性引用文件
　　本标准内容引用了下列文件或其中的条款。凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。
　　GB17378.3 海洋监测规范 第 3 部分：样品采集、贮存与运输
　　GB/T 14581 水质 湖泊和水库采样技术指导
　　HJ/T91 地表水和污水监测技术规范
　　HJ91.1 污水监测技术规范
　　HJ164 地下水环境监测技术规范
　　HJ442.3 近岸海域环境监测技术规范 第三部分 近岸海域水质监测
　　3 方法原理
　　样品中苯氧羧酸类除草剂经液液萃取后净化或直接固相萃取，用具有紫外检测器的高效液色谱仪进行分离测定。根据保留时间定性，外标法定量。
　　4 干扰和消除
　　除草剂氯磺隆对 2,4-D 的测定有干扰，可将表 1 中 1min 前流动相 A/B 的比例调整到50/50，使 氯磺隆与 2,4-D 的色谱峰达到基线分离，从而消除干扰。2-氯苯酚对麦草畏、2,4-二氯苯酚对 MCPA、 4-氯-3-甲基苯酚对 2,4-D 的测定分别有干扰，可通过使用固相萃取柱(5.14)净化的方法消除干扰。
　　5 试剂和材料
　　除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为不含目标物的纯水。
　　5.1 磷酸：ρ(H3PO4)=1.87g/ml。
　　5.2 氯化钠(NaCl)。
　　使用前在 400 ℃灼烧 4h，冷却后密封保存在磨口玻璃瓶中。
　　5.3 无水硫酸钠(Na2SO4)：
　　使用前在 400 ℃灼烧 4h，冷却后密封保存在磨口玻璃瓶中。
　　5.4 氢氧化钠(NaOH)。
　　5.5 甲醇(CH3OH)：农残级。
　　5.6 二氯甲烷(CH2Cl2)：农残级。
　　5.7 丙酮(CH3COCH3)：农残级。
　　5.8 甲醇水溶液：2+3。
　　用甲醇(5.5)和水按 2:3 体积比混合。
　　5.9 氢氧化钠溶液：c(NaOH)=6mol/L。
　　称取 24.0g 氢氧化钠(5.4)溶于水中，稀释至 100ml。
　　5.10 苯氧羧酸类除草剂标准物质： w ≥96%。
　　5.11 苯氧羧酸类除草剂标准贮备液：ρ=1.00mg/ml。
　　分别称取苯氧羧酸类除草剂标准物质(5.10)0.100g(精确到 0.1mg)，用丙酮(5.7)溶解后， 转移到 100ml 容量瓶中，用丙酮(5.7)定容至标线。标准贮备液在-20 ℃下避光、冷冻保存，保存期为1年。也可直接购买有证标准溶液，并按照制造商的产品说明书保存。
　　5.12 苯氧羧酸类除草剂标准中间液：ρ=100µg/ml。
　　取 1.00ml 苯氧羧酸类除草剂标准贮备液(5.11)于 10ml 容量瓶中，用丙酮(5.7)定容至标线，于4℃下避光、冷藏保存，保存期为60d。
　　5.13 苯氧羧酸类除草剂标准使用液：ρ=2.00µg/ml。
　　取 200µl 苯氧羧酸类除草剂标准中间液(5.12)于10 ml 容量瓶中，用甲醇水溶液(5.8)定容 至标线，于 4 ℃下避光、冷藏保存，保存期为 40d。
　　5.14 固相萃取柱：填料为苯乙烯/二乙烯苯-N-乙烯基吡咯烷酮聚合物或其他等效萃取柱，60mg/3 ml。
　　5.15 滤膜：0.22µm 聚四氟乙烯膜。
　　5.16 氮气：纯度≥99.99%。
　　6 仪器和设备
　　6.1 高效液相色谱仪：耐压 6MPa(600bar)，具紫外检测器或二极管阵列检测器。
　　6.2 色谱柱：填料粒径为 2.7µm，柱长15cm，内径 4.6mm 的 C8反相色谱柱，或其它适用于酸性 条件的等效色谱柱。
　　6.3 浓缩装置：氮吹仪、旋转蒸发仪等。
　　6.4 自动固相萃取仪或固相萃取装置。
　　6.5 样品瓶：1000ml 具磨口塞的棕色玻璃瓶或带聚四氟乙烯衬垫螺口棕色玻璃瓶。
　　6.6 一般实验室常用仪器和设备。
　　7 样品
　　7.1 样品采集和保存
　　按照 GB 17378.3、GB/T14581、HJ/T91、HJ 91.1、HJ 164、HJ 442.3 要求进行样品采集。样品采集后，4 ℃冷藏、避光保存，7d 内完成萃取，萃取液在 15d 内分析完毕。
　　7.2 试样的制备
　　7.2.1 样品水解
　　量取 250ml 水样至 500ml 分液漏斗中，用氢氧化钠溶液(5.9)调节溶液 pH≥12，摇匀后静置 1h。
　　注：如果不需要测定苯氧羧酸酯类化合物，可以不进行样品的水解。
　　7.2.2 液液萃取
　　用磷酸(5.1)调节水解后的试样(7.2.1)至 pH≤2，加入15g 氯化钠(5.2)，振摇使其溶解。 加 20ml 二氯甲烷(5.6)，振荡放气后，振荡萃取 5min，静置 15min，待两相分层后，收集有机相 于三角瓶中。再用 20ml 二氯甲烷重复萃取两次。合并有机相，有机相经无水硫酸钠(5.3)脱水后 于 40 ℃水浴氮吹浓缩至近干，用 5ml 实验用水溶解，待净化。
　　将固相萃取柱(5.14)放到固相萃取装置(6.4)上。用 5 ml 甲醇(5.5)以 2 ml/min 左右速度 通过固相萃取柱，在填料将要暴露于空气之前，向柱上加 5ml 实验用水，待实验用水剩约 1ml 左右 时，停止活化。向活化后的萃取柱上加入待净化的萃取液，并以 1ml/min 速度全部通过柱子后，继 续抽吸 10min 或用氮气(5.16)吹扫，使萃取柱干燥。然后用 10ml 甲醇(5.5)洗脱，收集洗脱液，于 50 ℃水浴氮吹浓缩至近干，用甲醇水溶液(5.8)定容至 1.0ml，混匀后经 0.22μm 滤膜(5.15)过滤，待测。
　　7.2.3 水样直接固相萃取
　　对于除草剂工业废水，将水样或水解后的试样(7.2.1)用磷酸(5.1)调 pH 为中性，取 5.0ml 样品以 1ml/min 速度全部通过活化后的固相萃取柱(7.2.2)，继续抽吸 10min 或用氮气(5.16)吹 扫，使萃取柱干燥。然后用 10ml 甲醇(5.5)洗脱，收集洗脱液，于 50 ℃水浴氮吹浓缩至近干， 用甲醇水溶液(5.8)定容至 1.0ml，混匀后经 0.22μm 滤膜(5.15)过滤，待测。
　　7.3 空白试样的制备
　　用实验用水代替样品，按照与试样的制备(7.2)相同的步骤进行空白试样的制备。
　　8 分析步骤
　　8.1 仪器参考条件
　　流动相 A：甲醇；流动相 B：磷酸水溶液(用磷酸调 pH=3.0±0.1)；流速：0.5ml/min；柱温： 30 ℃；检测波长：230nm；进样量：20.0μl。梯度洗脱程序见表 1。　　8.2 标准曲线的建立
　　分别取适量苯氧羧酸类除草剂标准使用液(5.13)，用甲醇水溶液(5.8)稀释，制备至少 5 个 浓度点的标准系列，目标化合物的质量浓度分别为 0.020mg/L、0.040mg/L、0.400mg/L、1.00mg/L、 2.00mg/L、4.00mg/L(此质量浓度为参考浓度)。按照仪器的参考条件(8.1)，由低浓度到高浓度 依次进样，以标准系列溶液中目标化合物的质量浓度为横坐标，对应的峰面积或峰高为纵坐标，建立标准曲线。
　　8.3 测定
　　按照与标准曲线的建立(8.2)相同的条件对净化后的试样(7.2.2或7.2.3)进行测定。当水样 的浓度超出标准曲线的线性范围时，应减少取样量或稀释洗脱液后，再进行测定。
　　8.4 空白试验
　　按照与试样测定(8.3)相同的条件对空白试样(7.3)进行测定。
　　9 结果计算与表示
　　9.1 定性分析
　　根据样品中目标化合物与标准系列中目标化合物的保留时间进行定性，可采用标准加入法、不 同波长下的吸收比或扫描紫外吸收光谱等方法辅助定性。必要时，可采用高效液相色谱-三重四极杆质谱法对目标化合物进行确认。7种除草剂的离子对和多离子监测条件参见附录B。
　　在本标准规定的仪器参考条件(8.1)下，苯氧羧酸类除草剂的标准色谱图见图 1。　　9.2 结果计算　　9.3 结果表示
　　测定结果小数点后位数的保留与方法检出限一致，最多保留3位有效数字。
　　10 准确度
　　10.1 精密度
　　10.1.1 直接固相萃取的精密度
　　6家实验室对7种苯氧羧酸类除草剂浓度分别为 12.0μg/L、80.0μg/L 和 600μg/L 的空白加标样 品进行了6次重复测定：实验室内相对标准偏差分别为 1.5%——8.7%、1.7%——7.9%和 1.1%——8.1%； 实验室间相对标准偏差分别为 3.7%——7.8%、 3.2%——14.3%和 3.3%——25%；重复性限分别为 1.4µg/L—— 1.9µg/L、 5.2µg/L——12.0µg/L 和 59µg/L——92µg/L；再现性限分别为 1.7µg/L——3.1µg/L、 12.9µg/L——26.5µg/L 和 111µg/L——357µg/L。
　　6 家实验室对7种苯氧羧酸类除草剂浓度为200μg/L 的统一工业废水加标样品进行了6次重复 测定：实验室内相对标准偏差为 1.6%——8.8%；实验室间相对标准偏差为 3.8%——22%；重复性限为 24µg/L——40µg/L；再现性限为31µg/L——95µg/L。
　　10.1.2 液液萃取的精密度
　　6 家实验室对7种苯氧羧酸类除草剂浓度分别为 0.240 μg/L、1.60μg/L 和 12.0μg/L 的空白加标 样品进行了 6 次重复测定：实验室内相对标准偏差分别为 2.1%——17%、1.4%——11%和 2.0%——9.7%； 实验室间相对标准偏差分别为 2.8%——10%、6.3%——24%和 4.8%——19%；重复性限分别为 0.02μg/L—— 0.04μg/L、0.16 μg/L——0.26 μg/L 和 1.5 μg/L——2.5μg/L；再现性限分别为 0.04 μg/L——0.07 μg/L、0.33 μg/L——0.83μg/L 和 2.2μg/L——5.9μg/L。
　　6家实验室对7种苯氧羧酸类除草剂浓度为0.240μg/L的统一地表水加标样品进行了6次重复测 定：实验室内相对标准偏差为 2.1%——16%；实验室间相对标准偏差为 4.3%——14%；重复性限为 0.04 μg/L——0.05μg/L；再现性限为 0.05μg/L——0.10μg/L。
　　6 家实验室对 7 种苯氧羧酸类除草剂浓度为 1.60μg/L 的统一生活污水加标样品进行了 6 次重复 测定：实验室内相对标准偏差为 1.8%——15%；实验室间相对标准偏差为 8.1%——16%；重复性限为 0.2 μg/L——0.4μg/L；再现性限为 0.4μg/L——0.8μg/L。精密度结果参见附录C。
　　10.2 正确度
　　10.2.1 直接固相萃取的正确度
　　6 家实验室对7种苯氧羧酸类除草剂浓度分别为 12.0μg/L、80.0μg/L 和 600μg/L 的空白加标样 品进行了加标回收率测定。麦草畏的加标回收率分别为 85.8%——105%、65.0%——94.5%和 57.6%—— 100%，其他除草剂的加标回收率分别为 85.7%——108%、81.3%——103%和 78.0%——105%。加标回收率 最终值分别为 93.8%±6.8%——97.9%±14.8%、79.6%±22.8%——101%±19.0%和 84.7%±42.0%—— 99.1% ±13.8%。 6 家实验室对含苯氧羧酸类除草剂的工业废水进行了加标回收率测定，加标浓度为 200µg/L， 麦草畏的加标回收率为 51.0%——96.0%，其他除草剂加标回收率为 83.3%——115%，加标回收率最终值 为 72.8%±15.2%——102%±9.4%。
　　10.2.2 液液萃取的正确度
　　6 家实验室对7种苯氧羧酸类除草剂浓度分别为 0.240 μg/L、1.60μg/L 和 12.0μg/L 的空白水样 加标样品进行了加标回收率测定。麦草畏的加标回收率分别为 70.8%——90.8%、52.1%——93.8%和 51.5%——87.8%。其他除草剂的加标回收率分别为 82.1%——105%、85.6%——118%和 70.3%——118%。加 标 回 收 率 最 终 值 分 别 为 81.8%±16.6% —— 98.6%±13.0% 、 75.5%±22.8% —— 105%±15.8% 和 69.5%±26.2%——100%±25.4%。
　　6 家实验室对含7种苯氧羧酸类除草剂的地表水和生活污水进行了加标回收率测定，加标浓度分别为0.240μg/L和 1.60μg/L。麦草畏的加标回收率分别为58.6%——90.2%和64.2%——91.9%；其他除草剂的加标回收率分别为67.5%——116%和 68.7%——113%，加 标 回 收率 最 终值分别为78.2%±11.7%——99.4%±12.6%和 76.0%±11.7%——96.8%±15%。 正确度结果参见附录C。
　　11 质量保证和质量控制
　　11.1 空白试验
　　每 20 个样品或每批次(少于2个样品/批)至少分析1个实验室空白，空白中目标化合物的浓 度应低于方法检出限。
　　11.2 校准
　　标准曲线的相关系数≥0.999。每 20个样品或每批次(少于20个样品/批)应分析测定1个曲线 中间浓度点标准溶液，测定结果与曲线该点浓度的相对误差应在±15%以内。否则，应建立新的标准曲线。
　　11.3 平行样
　　每20个样品或每批次(少于20个样品/批)应分析测定1个平行样，平行样测定结果的相对偏差≤25%。
　　11.4 空白加标和基体加标
　　每20个样品或每批次(少于20个样品/批)应分析测定1个基体加标样品，麦草畏的回收率应在50%——110%之间，其他除草剂的加标回收率应在65%——120%之间。
　　12 废物处置
　　实验中产生的有机废液应集中收集和保管，并做好相应的标识，依法委托有资质的单位进行处理。
　　13 注意事项
　　13.1 苯氧羧酸类除草剂常以酯类化合物形式使用，但其酯类化合物不稳定，进入水体后易水解成相应的酸类化合物。如果要测定水中苯氧羧酸类除草剂的总量，需要在萃取前加碱将苯氧羧酸的酯类化合物先水解成相应的苯氧羧酸盐类化合物。
　　13.2 对于样品中有碱、中性化合物干扰测定，可向水解后的试样(7.2.1)中加入 20ml 二氯甲烷(5.6)，振荡放气后，振荡萃取5min，静置15min，待两相分层后，弃去下层有机相。再加入 20ml 二氯甲烷重复萃取一次，弃去下层有机相，水相按萃取步骤(7.2.2)进行萃取。
　　原标题：关于征求《水质 浮游植物的测定 显微镜计数法(征求意见稿)》等2项国家生态环境标准意见的通知相关资料下载：附件3&4.pdf